原理
溴甲酚绿于pH4.0环境中,在有外离子去垢剂“
吐温20”存在时,可与白蛋白形成蓝绿色复合物,颜色之深浅与白蛋白含量成正比。
试剂
1、单一试剂
蒸馏水 300毫升
85-90%乳酸 1毫升
溴甲酚绿 50毫克
振摇溶解后加“吐温20” 1毫升
硫柳汞 50毫克
蒸馏水加至500毫升
2.5mol/L(100g/L)氢氧化钠或85-90%乳酸调正至pH4.0。在室温保存,稳定数月。
2、白蛋白标准血清40g/L(0.04g/ml)
注射人血清白蛋白、经消化法或醋酸纤维膜电泳法,测知白蛋白含量,然后用7.7mmol/L(500mg/L)叠氮钠,稀释成每毫升含白蛋白0.04克。置冰箱保存。
操作
血清白蛋白测定操作步骤
加入样本及试剂(ml) |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
血清 |
0.05 |
— |
— |
标准血清(40g/L) |
— |
0.05 |
— |
单一试剂 |
5.0 |
5.0 |
5.0 |
混匀、放室内30分钟后,用630nm或红色滤光板比色,以空白管校正吸光度至0点,读取各管吸光度。 |
注意事项
1、比色务于30分钟内完成。否则影响结果。
2、溴甲酚绿为pH指示剂,其显色剂的pH值必须为4.0,所以所用器材必须清洁,无酸碱污染,否则对结果影响很大。
3、溴甲酚绿不纯时,可按下法提纯。即无水乙醇加热约至60℃,加入溴甲酚绿使达饱和,加入少量活性炭,趁热过滤,将滤液置冰箱内过夜,待析出结晶,过滤,将结晶干燥后备用。