ELISA技术检测犬瘟热病的中药辅助治疗临床效果的研究

张永霞，王金福
(上海农林职业技术学院，上海)

[摘 要]
在前期应用中药胶囊辅助治疗犬瘟热研究的基础之上，本研究将上海三家宠物医院2014~2016年就诊的186只犬瘟热病犬随机分成两组，第一组96只，仅用西药治疗。第二组90只，在西药治疗的基础上用课题组研发的中药胶囊进行辅助治疗。后随机选取64只(每组32只)，采集治疗前和治疗7天后的外周血血清中的犬瘟热病毒抗原进行ELISA检测。结果显示：用药前中药辅助治疗组的平均病毒含量高于单用西药组，但经t检验后，P > 0.05，差异不显著；用药7天后中药辅助治疗组的平均病毒含量显著低于单用西药组，经t检验，P < 0.01，差异极显著，表明中药辅助治疗能有效地杀灭犬瘟热病毒。

[药品]
中药胶囊中的中药生石膏、黄芩、黄连等均从上海余天成药店购买；犬六联高免血清产自军需大学兽医学院生物制品研究中心；犬瘟热单克隆抗体生产于北京世纪元亨动物防疫技术有限公司；诊断试纸为韩国瑞必诊犬瘟快速诊断试纸。

[试剂]
犬瘟热病毒(CDV)ELISA试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司 [1]。

[ELISA检测CDV浓度]
按照上海江莱生物科技有限公司的犬瘟热病毒(CDV)ELISA试剂盒说明书进行检测：从室温平衡20 min后的铝箔袋中取出96孔板；设置标准品孔，标准品的浓度依次为0、10、20、40、80、160 ng/ml，标准品孔各加不同浓度的标准品50 μL；样品孔中加入待测样本50 μL，空白孔不加；除空白孔外，标准品孔和样品孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的待测抗体100 μL，用封板摸封住反应孔，37℃恒温箱温育60 min；弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350 μL)，静置1 min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次；每孔加入A、B各50 μL，37℃避光孵育15 min；每孔加入终止液50 μL，15 min内，在450 nm波长处测定各孔的OD值。以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，绘制标准曲线，得到直线回归方程，将样品的OD值带入方程，计算出样品的浓度。

[两组治疗前后CDV含量对比结果]
以治疗情况为横坐标，以两组CDV浓度的平均值为纵坐标，绘制柱状图

[参考文献]
[ 1 ] Yoshida, E., Iwatsuki, K., Miyashita, N., et al. (1998) Molecular Analysis of the Nucleocapsid Protein of Recent Isolates of Canine Distemper Virus in Japan. Veterinary Microbiology, 59, 237-244.‍

[ 2 ] 李清艳. 动物传染病学[M]. 北京: 中国农业科学技术出版社, 2008: 235-237.

[ 3 ] 高琳, 汪崇, 等. 中药疗法和干扰素对犬瘟热治疗效果的比较研究[J]. 现代畜牧兽医, 2012(5): 44-47.

[备 注] [1]“江莱生物”10年以来一直致力于免疫学技术的积累与沉淀，目前江莱生物实验室占地约3000平米，技术研发团队50余人，配备了全球最先进的分析和检测设备，我们通过自主创新以及与国内外的科研单位合作研发，不断突破新技术，目前我们研发了上千种指标，质量成熟，并长期出口到欧美市场，赢得了众多科研机构的认可 ...

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