刺山柑总生物碱对系统性硬皮病小鼠基质金属蛋白酶及其抑制剂的影响
康小龙，刘晶，何承辉，卢军，杨俊玲
（1.新疆医科大学附属中医医院，新疆 乌鲁木齐 830000；2.新疆维吾尔自治区药物研究所，新疆 乌鲁木齐 830004）

【摘要】
目的 观察刺山柑总生物碱对系统性硬皮病（SSc）小鼠Ⅳ型胶原（Col-Ⅳ）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）和纤溶酶原激活物抑制因子-1（PAI-1）水平的影响，探讨其抗 SSc 组织纤维化的作用机制。方法 BALB/c 小鼠 90 只随机分为空白对照组、模型组、青霉胺组及刺山柑总生物碱低、中、高剂量组。除空白对照组外，其余各组小鼠背部注射盐酸博莱霉素建立 SSc 模型。成模后刺山柑总生物碱组小鼠背部外敷不同剂量刺山柑总生物碱乳膏，青霉胺组予青霉胺灌胃，空白对照组、模型组背部外敷不含药基质，每日 1 次，连续 60 d。末次给药后，ELISA 检测小鼠皮肤 Col-Ⅳ和血清 MMP-9、TIMP-1、PAI-1 含量。结果 与模型组比较，刺山柑总生物碱中、高剂量组小鼠血清 MMP-9 含量及 MMP-9/TIMP-1 比值升高，血清 TIMP-1 及皮肤 Col-Ⅳ含量降低（P＜0.05，P＜0.01），但对 PAI-1 水平无明显影响（P＞0.05）。结论 刺山柑总生物碱可通过调节 MMP-9/TIMP-1 失衡，减少 Col-Ⅳ合成，改善 SSc 组织纤维化。

【动物】
 周龄清洁级 BALB/c 小鼠 90 只，体质量 18～24 g，新疆实验动物研究中心，合格证号 SCXK（新）2003-0002，置于清洁级环境，普通饲料和水饲养。

【主要试剂与仪器】
小鼠 MMP-9 ELISA 试剂盒（批号 201502）、小鼠 TIMP-1 ELISA 试剂盒（批号 201502），小鼠 PAI-1 ELISA 试剂盒（批号E11030163），小鼠 Col-ⅣELISA 试剂盒（批号 201502），上海江莱生物科技公司 [1]；二辛可宁酸蛋白定量试剂盒（批号 20150223），江苏碧云天生物技术研究所。酶标仪，美国赛默飞世尔科技公司。

【分组、造模与给药】
实验小鼠随机分为空白对照组、模型组、青霉胺组（125 mg/kg）和刺山柑总生物碱低（225 mg/kg）、中（450 mg/kg）、高（900 mg/kg）剂量组，每组 15只，实验前用剃毛刀将背部毛剃除。采用博莱霉素皮下注射制备 SSc 动物模型，造模组小鼠背部皮下注射 300 μg/mL，每日 1 次，每次 0.1 mL，共 4 周，观察小鼠背部注射部位皮肤是否出现皮肤增厚、弹性变差等变化。4 周后，刺山柑总生物碱组小鼠背部外敷不同剂量的刺山柑总生物碱乳膏，青霉胺组给予青霉胺灌胃，空白对照组和模型组背部外敷不含药基质，1 次/d，连续 60 d。

【对模型小鼠皮肤Ⅳ型胶原含量的影响】
与空白对照组比较，模型组小鼠皮肤 Col-Ⅳ含量明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，刺山柑总生物碱各剂量组和青霉胺组皮肤 Col-Ⅳ含量明显降低（P＜0.01）。

【参考文献】
[1] 曹越兰,李欣,王群.槌果藤对硬皮病小鼠模型皮肤硬化抑制作用的实验研究[J].中国中药杂志,2008,33(2)：215-217.
[2] 曹越兰,李欣,郑敏.槌果藤对进行性系统性硬化症患者成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原产生的影响[J].中国中药杂志,2008,33(5)：560-562.
[3] 沈佚葳,王京,周平.阿维 A 对硬皮病小鼠的治疗作用及机制研究[J].中国医药导报,2013,10(25)：20-22.
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