血液样本是ELISA中最常见的生物液体样本，其中在检测上有全血、血清、血浆、血凝块和血细胞的区分，ELISA常用血清和血浆

血液是一种流体组织，在心血管系统内循环流动，起着运输物质的作用。血液组织是结缔组织的一种，由血浆和血细胞组成。

血浆内含血浆蛋白（白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原）、脂蛋白等各种营养成分以及无机盐、氧、激素、酶、抗体和细胞代谢产物等。血细胞有红细胞、白细胞和血小板。

哺乳类的血液具有凝血机制，血管破裂时，血小板会结集，堵塞血管破口，此时血浆中原本可水溶的血纤维蛋白等凝固成为血块，剩余的透明液体就叫做血清。

从采集样本来说，直接抽取采集的为全血，呈红色。静置后1-2h，会发生凝血反应，形成血清（呈黄色透明液体）和血凝块。在收集管中提前加入抗凝剂，混匀后离心，即可分离出血浆。

血清和血浆样本的主要区别在于血浆中抗凝剂和凝血因子的影响。

多数指标中血浆样本可以替代血清，前提是该指标不受抗凝剂成分和凝血因子的影响（如抗体类项目），但生化指标则不可用EDTA抗凝分离血浆，因为EDTA-K2此种抗凝剂不仅可以络合重金属Mg2+，也会致使K+的含量上升，故生化指标的最佳样本是血清。一般全血能收集到30-50%左右的血清/血浆。

血红蛋白类指标需采用溶血剂破碎血细胞后来进行测定，凝血因子类指标需使用血浆，其他部分指标血清血浆中有较大差异，血清血浆样本类型的选取，建议多参考国内外文献，选择合适的样本类型。

|   常见的采血管

真空采血管是采血材料中装血液标本的试管，管内有真空压力，在护士采血操作穿刺达到血管后，把穿刺针另一端插入试管，血管内的血液通过管内真空压力自然把血管内的血液往试管内排出，当达到一定采血量后管内的压力自然减小，不会继续出血。需要护士采血操作时使用，如果是事先把试管盖打开，管内的压力就会改变，不是成负压状态就没有真空压力的作用。

除红头管无添加外，其他采血管中均含有添加剂，需采血后颠倒混匀5/8次。血清管凝集后离心分离出血清，血浆管需要混匀后离心分离出血浆。用于ELISA测试的样本建议于 4℃保存24h 内完成离心分离，避免长时间存放/冻融引起血细胞破碎，发生溶血反应影响ELISA实验。

动物采血管少量采血，建议采用无菌无毒素的离心管收集，自然凝集后离心分离血清；或抗凝离心管（肝素/EDTA分离血浆），轻轻颠倒混匀后离心分离血浆。

|   剪尾取血法

将清醒鼠装入深颜色的布袋中，将鼠身裹紧，露出尾巴，用酒精涂擦或用温水浸泡使血管扩张，剪断尾尖后，尾静脉血即可流出，用手轻轻地从尾根部向尾尖挤捏，可取到一定量的血液。取血后，用棉球压迫止血。也可采用交替切割尾静脉方法取血。用一锋利刀片在尾尖部切破一段尾静脉，静脉血即可流出，每次可取0.3～0.5 ml，供一般血常规实验。三根尾静脉可替换切割，由尾尖向根部切割。由于鼠血易凝，需要全血时，应事先将抗凝剂置于采血管中，如用血细胞混悬液，则立即与生理盐水混合。

|   眼球后静脉丛取血法

左手持鼠，拇指与中指抓住颈部皮肤，食指按压头部向下，阻滞静脉回流，使眼球后静脉丛充血，眼球外突。右手持1％肝素溶液浸泡过的自制吸血器，从内呲部刺入，沿内下眼眶壁，向眼球后推进4～5 mm，旋转吸血针头，切开静脉丛，血液自动进入吸血针筒，轻轻抽吸血管(防止负压压迫静脉丛使抽血更困难)，拔出吸血针，放松手压力，出血可自然停止。也可用特制的玻璃取血管(管长7～10 cm，前端拉成毛细管，内径0.1～1.5 mm，长为1 cm，后端管径为0.6 cm)。必要时可在同一穿刺孔重复取血。此法也适用豚鼠和家兔。

|   眼眶取血法

左手持鼠，拇指与食指捏紧头颈部皮肤，使鼠眼球突出，右手持弯镊或止血钳，钳夹一侧眼球部，将眼球摘出，鼠倒置，头部向下，此时眼眶很快流血，将血滴入预先加有抗凝剂的玻璃管内，直至流血停止。此法由于取血过程中动物未死，心脏不断跳动，一般可取鼠体重4％～5％的血液量，是一种较好的取血方法，但只适用一次性取血。

|   心脏取血

动物仰卧固定于鼠板上，用剪刀将心前区毛剪去，用碘酒、酒精消毒此处皮肤，在左侧第3～4肋间用左手食指摸到心搏，右手持连有4～5号针头的注射器，选择心搏最强处穿刺，当针头正确刺入心脏时，鼠血由于心脏跳动的力量，血自然进入注射器。

|   断头取血

实验者带上棉手套，用左手抓紧鼠颈部位，右手持剪刀，从鼠颈部剪掉鼠头迅速将鼠颈端向下，对准备有抗凝剂的试管，收集从颈部流出的血液，小鼠可取血0.8～1.2 ml，大鼠可取血5～10 ml。

|   颈动静脉、股动静脉取血

麻醉动物背位固定，一侧颈部或腹股沟部去毛，切开皮肤，分离出静脉或动脉，注射针沿动静脉走向刺入血管。20 g小鼠可抽血0.6 ml，300 g大鼠可抽血8 ml。也可把颈静脉或颈动脉用镊子挑起剪断，用试管取血或注射器抽血，股静脉连续多次取血时，穿刺部位应尽量靠近股静脉远心端。

|   ELISA操作前必读 / 下载